Placeholder

Среда Левенштейна–Йенсена

Среда Левенштейна–Йенсена с добавлением яичной эмульсии используется для выращивания микобактерий, выделения чистой культуры и для оценки чувствительности к противотуберкулезным препаратам.

Состав**:

Ингредиенты
грамм/литр
L-Аспарагин
3,60
Калия дигидрофосфат
2,40
Магния сульфат
0,24
Магния цитрат
0,60
Картофельная мука
30,00
Малахитовый зеленый
0,40

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 37,24 г порошка в 600 мл дистиллированной воды, содержащей 12 мл глицерина (для некоторых видов микобактерий глицерин не добавлять). Прокипятить до полного растворения компонентов среды. Стерилизовать автоклавированием при 1 атм (1210С) в течение 15 мин. Приготовить стерильно 1000 мл эмульсии яиц. Асептически смешать 600 мл основы среды и 1000 мл яичной эмульсии до однородного состояния. Внести добавку Графта (Gruft Micobacterial Supplement FD053), если это необходимо. Разлить по пробиркам. Поместить пробирки в наклонном положении для формирования скошенной среды и прогревать (для коагуляции) при 850С в течение 45 мин.

Принцип и оценка результата:

Оригинальная пропись Левенштейна (1) была модифицирована Йенсеном (1), а Графт изменил среду добавлением двух антимикробных агентов (3,4). Среда, приготовленная на яичной основе, поддерживает рост различных видов микобактерий. Малахитовый зеленый, бензилпенициллин и налидиксовая кислота предотвращают рост большинства представителей сопутствующей флоры, в первую очередь той флоры, которая дает рост много раньше, чем микобактерии. РНК действует как стимулятор роста и позволяет повысить уровень высеваемости. Если могут быть выделены культуры бычьего или других глицерофобных видов микобактерий, глицерин добавлять не нужно. Малахитовый зеленый является не только ингибитором роста, но и pH-индикатором. Появление синих зон указывает на повышение кислотности за счет роста грамположительных контаминантов (например, Streptococcus spp.), желтые зоны выявляют контаминацию грамотрицательными бациллами. Протеолитические микроорганизмы формируют локальные зоны или полную деструкцию среды.

Среда Левенштейна–Йенсена в модификации Графта рекомендуется для выделения и культивирования штаммов Nocardia из мокроты, промывных вод желудка и другого клинического материала (6). Харди с соавт. (7) рекомендуют инокулировать и инкубировать каждую пробу втрех экземплярах:

А). для обнаружения сапрофитов — при комнатной температуре (250С);

Б). для оценки пигментации фотохромогенных и скотохромогенных микобактерий — при 350С (на свету и в темноте).

Наилучшие условия роста достигаются при 350С в атмосфере 5–10 % углекислого газа.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий порошок зеленовато-синего цвета.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет светлый голубовато-зеленый цвет с гладкой, слегка опалесцирующей поверхностью.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 2-4 недели при 350С в атмосфере 5 — 10% углекислого газа.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)
Среда Левенштейна-Йенсена
С добавкой Графта
M.tuberculоsis (25618)
Обильный рост, колонии гранулированные, неровные, бородавчатые, сухие, рыхлые
Нет роста
M.kansasii(12478)
Обильный рост, колонии фотохромогенные, от гладких до неровных
Нет роста
M.gordonae(14470)
Обильный рост, колонии гладкие, желтые и оранжевые
Нет роста
M.avium(25291)
Обильный рост, колонии гладкие, не пигментированные
Нет роста
M.smegmatis(14468)
Обильный рост, колонии морщинистые, слизистые, белые
Рост хороший или обильный,  колонии морщинистые, слизистые, белые

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже 25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре 2…8°С.